水产科学

作者：刘素萍, 付元帅, 喻杰, 张俊玲, 施志仪

单位：上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海 201306

关键词：褐牙鲆,miRNA,TRβ,pmirGLO-TRβ-3'-UTR,双荧光素酶报告基因技术

基金：国家自然科学基金资助项目(41676138).

甲状腺激素通过与其受体结合对褐牙鲆变态起重要的调控作用,而miRNAs通过结合靶基因3'-UTR在转录后水平调节靶基因的表达。为探讨miRNAs在褐牙鲆变态中的作用,通过生物信息学方法预测褐牙鲆TRβ基因3'-UTR存在的miRNAs结合位点,并利用3'-RACE方法克隆TRβ基因的3'-UTR序列,通过体外DNA重组技术构建应用于miRNAs靶向基因检测的双荧光素酶重组报告载体,利用细胞转染和双荧光素酶报告技术分析多个miRNAs与TRβ基因的作用关系。研究结果显示,克隆得到了一段长为437 bp的褐牙鲆TRβ基因的3'-UTR序列,发现3'-UTR序列上存在pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p、pol-miR-138和pol-miR-125a*的结合位点,成功构建了双荧光素酶重组报告载体,命名为pmirGLO-TRβ-3'-UTR。双荧光素酶报告分析结果表明,pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p和pol-miR-138均为作用于褐牙鲆TRβ的靶向miRNAs,而pol-miR-125a*对TRβ基因无直接的调节作用。研究结果将为后续深入研究miRNAs与TRβ在褐牙鲆变态发育中的功能及其作用机制提供基础。

来源：2020年第3期

《水产科学》期刊编辑部

查看水产科学杂志2020年第3期