水产科学

作者：陈福暖, 高晓琳, 曾晓怜, 谢彩霞, 汪志文, 鲁义善, 吴灶和, 王忠良, 王蓓

单位：1.广东海洋大学 水产学院,广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东省水产经济动物病害控制重点实验室,广东 湛江 524088; 2.广东海洋大学 深圳研究院,广东 深圳 518000

关键词：尼罗罗非鱼,CD2-like基因,基因克隆,原核表达

基金：国家自然科学基金青年基金资助项目(31702386);广东省科技厅国际科技合作领域项目(2017A050501037,2019 A050510044);广东海洋大学2019年“冲一流”省财政专项资金建设项目(校[2019]21号);广东海洋大学大学生创新创业训练计划项目(CXXL2018041).

依据数据库中预测的尼罗罗非鱼白细胞分化抗原2(CD2)基因(GenBank登录号:XM_005460661.4)序列,采用PCR扩增体质量(150±50) g尼罗罗非鱼CD2分子同源类似物(CD2-like)基因编码区片段,然后以其胞外区构建原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,并进行原核表达及条件优化,最后进行复性纯化,为进一步研究该CD2-like分子在罗非鱼中的免疫功能奠定基础。研究结果表明,罗非鱼CD2-like(OnCD2-like)基因(GenBank登录号:MN296489)编码区全长1110 bp,其中胞外区长558 bp。构建OnCD2-like胞外区的原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,将该重组质粒导入大肠杆菌BL21后,成功表达OnCD2-like胞外段重组蛋白。原核表达结果显示,目的蛋白分子质量为20 ku,主要以包涵体形式存在,而该包涵体蛋白复性纯化最佳条件为:37 ℃下,0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,经梯度稀释复性并纯化后可成功获得目的重组蛋白。

来源：2021年第5期

《水产科学》期刊编辑部

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