水产科学

作者：刘骥, 陈艳茹, 侯竹美, 徐冬雪, 谷元雪, 宋文琦, 宋宜泽, 夏斌

单位：青岛农业大学,海洋科学与工程学院,山东 青岛 266109

关键词：CRISPR-Cas13a,RPA,灿烂弧菌,仿刺参,快速分子检测

基金：国家自然科学基金资助项目(31902360);山东省一流学科项目;青岛农业大学高层次人才科研基金资助项目(1120030,1117001).

为预防和控制灿烂弧菌引发的仿刺参腐皮综合征,促进仿刺参养殖业的健康可持续发展,利用LwCas13a中特异性CRISPR RNA(crRNA)与靶RNA结合后可激活Cas13a蛋白对外源RNA分子附属切割活性的特征,结合重组酶介导的聚合酶扩增技术(RPA),建立1种针对灿烂弧菌gyrB基因的快速、灵敏、特异的定量检测方法——RPA-Cas13a。RPA-Cas13a可实现在37 ℃恒温下、60 min内对灿烂弧菌的快速实时检测。灵敏度测试结果显示,RPA-Cas13a检测限为550 拷贝/μL(gyrB),与荧光定量PCR的检测灵敏度水平一致;特异性测试结果表明,RPA-Cas13a对创伤弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌等其他弧菌及产黑假交替单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌等常见水产动物病原菌均无交叉反应,特异性较强。RPA-Cas13a方法对仿刺参体表黏液(32份)、养殖池塘水体(15份)和表层沉积物(10份)等57份环境样本的阳性检出率为8.77%,与传统荧光定量PCR方法的检出一致性高(Kappa=1.00),无统计学差异(P>0.05)。试验结果表明,灿烂弧菌的RPA-Cas13a新型定量检测方法,快速简便、灵敏特异,可为预防和控制仿刺参腐皮综合征的发生提供有力的分子工具。

来源：2023年第4期

《水产科学》期刊编辑部

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