水产科学

作者：胡泽超, 邹孝翠, 孙健, 边晨晨, 吉红

单位：西北农林科技大学 动物科技学院,陕西 杨凌 712100

关键词：实时荧光定量PCR,草鱼,内参基因筛选,脂肪组织,脂肪细胞,表达稳定性

基金：国家自然科学基金面上项目(31772863).

为探究4个内参基因在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中的稳定表达情况及筛选稳定性最佳的内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了在水温26.5～27.5 ℃下,摄食脂肪含量为4%、8%和12%的饲料4周、体质量为(15.0±0.5) g的草鱼腹腔脂肪组织中及在成脂培养基中诱导分化至第6天时,用含0、40、80、120 mmol/L的油酸处理的草鱼脂肪细胞中的18S rRNA基因、β-actin基因、GAPDH基因和EF1α基因等4个候选内参基因的转录水平,随后采用GeNorm、NormFinder和Bestkeeper软件分析其表达稳定性,以筛选出特定条件下草鱼脂肪组织及脂肪细胞中稳定表达的内参基因或其组合。结果显示,候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物和理想的扩增效率。在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中,候选内参基因表达稳定性顺序分别为18S rRNA>β-actin>GAPDH>EF1α和18S rRNA=β-actin>GAPDH>EF1α。GeNorm标准化因子配对差异分析显示, 其配对变异值均小于0.15,即草鱼脂肪组织及脂肪细胞中最适内参基因数至少有2个。结果表明,在草鱼脂肪组织和脂肪细胞中稳定表达的是18S rRNA基因,建议选择18S rRNA、β-actin基因作为草鱼脂肪组织及脂肪细胞内参基因组合。

来源：2023年第4期

《水产科学》期刊编辑部

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