水产科学

作者：张彦冰, 叶加鑫, 孙威, 刘晓丹, 林强

单位：1.中国水产科学研究院 珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,广东 广州 510380;2.扬州大学 动物科学与技术学院,江苏 扬州 225009

关键词：鳜弹状病毒,糖蛋白,杆状病毒表达系统,重组杆状病毒

基金：国家自然科学基金资助项目(32002420);中国博士后科学基金资助项目(2021M702761);中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(2019SJ-XT4);农业农村部渔用药物创制重点实验室开放基金资助项目(201804);江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(21)3162);江苏省种业振兴“揭榜挂帅”项目(JBGS〔2021〕132).

近年来,鳜弹状病毒引起的病害频发,该病毒传播快,致病性强,是引起鳜病害的主要病原之一。鳜弹状病毒基因组编码5个结构蛋白,其中糖蛋白G是病毒表面的主要抗原,为实现该抗原蛋白的大量表达,利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白G片段插入杆状病毒穿梭载体pFastBac1中转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,筛选阳性克隆获得重组转移载体pFastBac-G,再将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑与抗性筛选后获取重组杆粒rBacmid-G,随后利用脂质体转染法将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒。将获取到的P3代重组病毒感染Sf9昆虫细胞进行重组蛋白的SDS-PAGE检测,成功表达后利用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白,随后对重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示在大于50 ku处有一条特异性条带,而对照组无条带,表明制备的抗原能与抗体特异性结合。结果表明,鳜弹状病毒糖蛋白G在杆状病毒表达系统成功表达。本试验结果可为鳜弹状病毒糖蛋白G疫苗的研发和大规模生产提供技术支撑。

来源：2024年第2期

《水产科学》期刊编辑部

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