水产科学

作者：罗寒雨, 刘笑, 郑菲菲, 毛天宇, 冯柯尧, 孙艳红, 祝东梅

单位：1.华中农业大学 水产学院,水产养殖国家级实验教学示范中心,湖北 武汉 430070;2.武汉市农业科学院,湖北 武汉 430345

关键词：翘嘴鳜,肝脏,原代细胞,培养技术

基金：湖北省大学生创新创业训练计划项目(S202110504219,S202210504206);湖北洪山实验室开放课题项目(2021hskf015).

运用组织块贴壁法、酶消化法、组织块联合酶消化法探究体质量(33.2±0.2) g翘嘴鳜肝脏组织原代细胞最适培养方法,采用3种培养基(M199培养基、L15培养基、M199-L15)、3种培养容器(12孔板、6孔板、T25培养瓶)及有无CO2探究翘嘴鳜肝脏组织原代细胞最适培养条件,采用线粒体16S rRNA基因序列和染色体数目鉴定细胞,研究氯化铵(0、1、5、10 mmol/L)对细胞形态和增殖的影响。试验结果显示:0.25%胰蛋白酶-EDTA消化翘嘴鳜肝脏组织获得细胞,接种到T25培养瓶,生长培养基为M199-L15(体积比1∶1)混合培养基并添加20%体积胎牛血清,在28 ℃含5% CO2的培养箱中培养,第2~3天贴壁细胞占瓶底的25%~30%,第4~5天细胞长满瓶底的70%~80%,第6~7天得到可传代的原代细胞;传代后细胞饱满、增殖能力强,为上皮样和成纤维样的混合,以成纤维样细胞为主,已传到10代;细胞线粒体16S rRNA基因测序结果与GenBank中基因序列(HQ731435.1)的一致率达99.05%,染色体数目为48条,证明此细胞来自翘嘴鳜;5 mmol/L和10 mmol/L氯化铵暴露对细胞形态和活力有显著影响(P<0.05)。本试验建立了翘嘴鳜肝脏组织原代细胞培养技术,为开展翘嘴鳜生物学、疾病学、营养学及遗传学等提供重要基础,同时为鱼类肝脏组织细胞原代培养和建系提供重要参考。

来源：2024年第5期

《水产科学》期刊编辑部

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